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染色体杂合性缺失 ( loss of heterozygosity，LOH)在恶性肿瘤中是一种常见的染色体畸变。发生于HLA染色体区域的LOH（即HLA loss）会影响HLA的正常表达，使肿瘤细胞逃避机体免疫细胞的杀伤，导致肿瘤细胞免疫逃逸。HLA loss在实体瘤如非小细胞肺癌中常见，也可发生在血液肿瘤中。研究发现，HLA-loss在单倍体移植中出现概率最高（有研究为25%，也有研究为近40%），存在错配的无关供者移植也会出现，在脐血移植中比较罕见，亲缘全相合则暂时没有发现。HLA loss是造血干细胞移植后免疫逃逸和复发的主要机制之一，且HLA loss的比例与供患之间HLA的错配位点数量有关。
移植后HLA loss的检测对于明确复发原因，指导复发治疗有非常重要的意义。由于错配位点的丢失，常规的复发治疗手段，如DLI输注，在HLA loss复发中并不适用并需严格禁止，因为HLA loss导致的复发中，肿瘤细胞会丢失了自己特有的抗原，并通过重组给自己穿了一件“新马甲”，但是体细胞仍然会表达原先的抗原分子，所以DLI输注不会产生GVL效应，并且会产生严重的GVHD效应。

HLA loss的检测一般有两种思路：

1）分选出肿瘤细胞，再检测其HLA高分辨型别。

患者本身HLA-A:02:01,24:02 供者为HLA-A:02:01,05:01，如果患者复发后分选肿瘤细胞检测HLA结果显示为HLA-A：02:01,02:01，则患者可能发生HLA loss型复发。但是由于涉及到分选肿瘤细胞，分选及操作比较困难且不容易分选到足够实验要求的细胞量，一般不采用这种方法。

2）以STR嵌合和HLA嵌合来进行比较。

患者发生复发后STR嵌合结果显示供者细胞比例为80%，则患者自己细胞有20%，如果HLA的嵌合结果显示患者自己的HLA型别只有1%，那就说明可能发生loss型复发。目前我们主要以这种思路来鉴别患者是否发生了HLA loss型复发。这里我们需要注意的是HLA loss检测仅针对复发的患者，疾病复发，肿瘤细胞大量增殖导致嵌合率下降。上述例子中供者细胞嵌合率掉到80%以后我们认为20%属于患者的那部分细胞大部分是肿瘤细胞。如果是排斥导致的嵌合率下降则不需要关注HLA loss问题。所以我们还需要结合骨髓/外周血涂片，流式微残等检测综合评估。

那么在思路2中有两种方法可以进行检测，分别是荧光PCR平台及二代测序平台。

1）荧光PCR法检测，需要针对患者特异型别（即患者有，而供者没有）的HLA位点设计引物探针，检测术后患者特异型别HLA嵌合率，通过患者HLA嵌合率与STR/微嵌合嵌合率对比判断患者是否发生HLA-LOSS。该方法具有平台常规，成本低，报告快等优点，但是不能覆盖所有的患者，因为前提是必须有患者特异性的HLA位点可供检测。

在这个病例中，红框标出的就是患者特异性的HLA位点，但是不是所有的患者特异性位点都能纳入到检测体系中。能够纳入到我们检测体系中的HLA位点必须拥有其他位点没有的特异性序列，这样才能以这段特异性序列是否有发生扩增去判断样本中是否含有该位点或计算含有该位点的比例，从而帮助我们判断HLA嵌合率的值。

像这个病例中只有A*01:01和DQB1*05:01在我们检测体系中，所以可以使用荧光PCR法进行检测。找到患者可检测的特异性HLA位点以后我们还需要用供患者术前标本来验证这些位点是否是患者特有的作为质控。但是需要注意的是如果患者的特异性HLA位点属于HLA-I类，而HLA的缺失却发生在HLA-II类上就有可能出现假阴性的结果。

患者嵌合率的结果显示供者细胞为53.11%，也就是说患者自身细胞比例为46.89%。以HLA嵌合结果显示患者特异性HLA型别嵌合率为0.116%，所以该患者发生HLA loss型复发。

2）二代测序法，该方法是以二代测序平台对HLA区域进行测序从而判断HLA嵌合率，只要HLA有错配就可以检测，无需评估是否有患者特异性HLA位点在检测体系内，适用性更广，因为检测了全部HLA区域能够避免假阴性结果的出现，但是经济成本及时间成本较高。

以二代测序平台对患者术后标本进行检测，分别对供患者HLA-A、B、C、DRB1、DQB1、DPB1位点进行扩增测序，得到每个位点供患者HLA嵌合的比例，最后与荧光PCR法类似，与STR嵌合率来进行比较判断是否发生了HLA loss型复发。

HLA loss型复发送检流程

HLA loss型复发的检测，几种方法各有优劣，可结合临床具体情况进行选择。在患者发生复发后我们评估STR嵌合率结果、患者特异性HLA位点能否检测、有无术前标本、是否急需检测结果等来选择最佳检测方案。

【参考文献】

[1] Dholaria B , Savani B N , Labopin M , et al. Clinical applications of donor lymphocyte infusion from an HLA-haploidentical donor: consensus recommendations from the Acute Leukemia Working Party of the EBMT[J]. Haematologica, 2019, 105(1):haematol.2019.219790.

[2] Loss of mismatched HLA in leukemia after stem-cell transplantation.[J]. New England Journal of Medicine, 2009, 361(5):478-488.

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